BC Assay

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La méthode BCA (Pour BiCinchoninic acid Assay), ou BC Assay, est un dosage colorimétrique des protéines, basé sur l'acide bicinchonique.

Principe[modifier | modifier le code]

Les protéines réduisent l'ion cuivrique Cu(II) en Cu(I) en milieu alcalin. L'acide bicinchoninique est un réactif colorigène hautement spécifique pour le Cu(I), qui forme un complexe pourpre ayant une absorption optique maximale à 562 nm (peut être lu entre 540 et 590nm). L'absorbance est proportionnelle à la concentration de protéines. Cette méthode est une alternative à la méthode Lowry, elle-même une amélioration du réactif Folin-Ciocalteu.

Usage[modifier | modifier le code]

Le BC Assay est utilisable dans une gamme de concentrations de 0,5 µg/ml à 2 mg/ml selon les formulations, et est beaucoup plus linéaire que l'autre dosage colorimétrique largement utilisé au laboratoire, basé sur le Coomassie (méthode de Bradford). Il présente en outre 2 à 3 fois moins de variations de signal selon le type de protéines. Il faut cependant réaliser une gamme d'étalonnage avec une protéine référence.

Son usage a été popularisé par le fait qu'il s'accommode d'échantillons contenant des substances classiquement interférentes avec le Bradford, notamment nombreux détergents (SDS), les lipides, les acides nucléiques. Ses limitations concernent les échantillons contenant des agents réducteurs ou chélatants (ou la nécessité de combiner des méthodes de dessalage (dialyse, précipitation au TFA) pour enlever ces substances).

Le BC Assay est aussi utilisable pour doser les ions cuivriques, et les sucres (réducteurs).

Historique[modifier | modifier le code]

La méthode BCA a été inventée par Paul Smith en 1985.

Autres méthodes de dosage des protéines[modifier | modifier le code]

Dosage par spectrométrie UV

Dosage par le Coomassie (méthode de Bradford)

Dosage par l'épicocconone

Dosage par le WST-1

Dosage par le réactif de Biuret

Dosage par le réactif de Lowry

Dosage par la méthode de Kjeldahl (de l'azote en fait)

Références[modifier | modifier le code]

  • (en) Paul Smith et al., Measurment of protein using bicinchoninic acid, Anal.Biochem. 150, 75-85

protocole BC Assay