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Dénombrement microbiologique sur milieu liquide
[modifier | modifier le code]Introduction
[modifier | modifier le code]Afin de prouver la présence de micro organisme à l'aide de ce type de dénombrement, la révélation se fait par la lecture d'un trouble sur un tube. Ensuite, la lecture se fera à l'aide de l'association de chaque résultats relevés sur chaque tubes. Cette lecture nous donnera donc un chiffre interprétable aboutissant à une quantité de microorganisme présent ou non dans la matrice initiale.
A.) NPP
[modifier | modifier le code]Tout d'abord, afin de vérifier la présence d'un ou de plusieurs microorganismes dans une matrice, il faut effectuer une gamme de dilution allant de 100 à une dilution assez important qui soit significative. Ensuite, il faudra donc ensemencer un milieu sélectif en fonction de l'espèce à isoler. Un résultat positif (+) correspond à un trouble ou une production de gaz au sein du tube alors qu'un résultat négatif (-) signifie qu'il n'y a eu aucune croissance dans le tube.
a – Principe général
[modifier | modifier le code]Il faut donc reporter dans un tableau les différents résultats obtenus avec les + et les -. Lorsque le résultat des tests montre un passage de positif à négatif, la concentration en microorganismes dans le milieu initial est comprise entre les dilutions ou le test est positif en dernier et celui où il est négatif en premier
ex :
| Volume de l'inoculum | Produit pure 100 | 10-1 | 10-2 | 10-3 | 10-4 | 10-5 | 10-6 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Résultats | + | + | + | + | - | - | - |
La concentration en bactérie dans la matrice est donc comprise entre 103 et 104 UFC/mL
Lorsque tous les résultats sont positifs, la concentration en microorganismes sera donc de l'inverse de la plus grande dilution effectuée en UFC/mL
Au contraire, lorsqu'il n'y a que des résultats négatifs, la concentration en microorganismes est inférieur à 1 UFC/mL
b – Méthode de NPP (table de Mac Grady)
[modifier | modifier le code]Deux tubes par dilutions
Il faut donc ensemencer de 2 tubes pour chaque dilution. La méthode du NPP(Nombre le Plus Probable), consiste à interpréter les résultats en comparant les différents essais et leurs résultats. Après incubation, noter pour chaque essai si le résultat est positif ou négatif. Pour chaque dilution, affecter un chiffre égal à la somme des tubes positifs.
| Dilutions | 100 | 10-1 | 10-2 | 10-3 | 10-4 |
|---|---|---|---|---|---|
| Résultats | +/+ | +/+ | +/+ | +/+ | -/- |
| Chiffre attribué | 2 | 2 | 2 | 1 | 0 |
Afin de déduire un paramètre statistique de se tableau, il faut choisir une suite de 3 chiffres consécutifs donnant un nombre inférieur à 220 (meilleure répartition dans
les dilutions). Ensuite, la table de Mac Grady permet de lire le NPP pour 2 tubes par dilution.
Nous pouvons donc déduire la concentration en micro-organismes par mL de produit pur [N] :
[N] = NPP . Fd Vinoculum
Dans le cas de l’exemple, on choisit 210 (car < 220) pour la dilution 10-2 Dans la table de Mac Grady, le NNP correspondant à 210 est 6,0. [N] = 6,0.102 UFC/mL.
Trois tubes par dilutions
| Dilutions | 100 | 10-1 | 10-2 | 10-3 | 10-4 |
|---|---|---|---|---|---|
| Résultats | +/+/+ | +/+/+ | +/+/- | +/-/- | -/-/- |
| Chiffre attribué | 3 | 3 | 2 | 1 | 0 |
Afin de déduire un paramètre statistique de se tableau, il faut choisir une suite de 3 chiffres consécutifs donnant un nombre inférieur à 330 (meilleure répartition dans les dilutions). Ensuite, la table de Mac Grady permet de lire le NPP pour 3 tubes par dilution.
[N] = NPP * Fd Vinoculum
Dans le cas de l’exemple, on choisit 321 (car < 330) pour la dilution 10-1. Dans la table de Mac Grady, le NNP correspondant à 321 est 15.
[N] = 15.101 = 1,5.102 UFC/mL.
Sources :
Techniques de dénombrement, C.LARCHER[1]
Microbiologie fondamentale, C.CRUZ[2]
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- Techniques de dénombrement, C.LARCHER
- Microbiologie fondamentale, C.CRUZ