La saison 2000-2001 du Championnat du Luxembourg de football est la 87e édition du championnat de première division au Luxembourg. Les douze meilleurs clubs du pays se retrouvent au sein d'une poule unique, la Division Nationale, où ils s'affrontent deux fois, à domicile et à l'extérieur. À l'issue du championnat, les quatre premiers disputent une poule pour le titre tandis que les huit derniers disputent la phase de relégation : les huit clubs sont répartis en deux poules de quatre et se rencontrent deux fois, le dernier de chaque poule est relégué en D2.
C'est le F91 Dudelange, champion en titre, qui remporte la compétition en terminant en tête de la première phase puis en tête de la poule pour le titre. C'est le 2e titre de champion du Luxembourg de l'histoire du club après celui gagné la saison précédente.
Les 4 premiers du classement à l'issue de la première phase se disputent le titre national. Les formations rencontrent à nouveau 2 fois leurs adversaires, à domicile et à l'extérieur, en démarrant cette deuxième phase avec la totalité des points acquis en première phase.
Les 8 autres clubs, non concernés par la poule pour le titre, disputent les poules de relégation. Répartis en 2 poules de 4, ils rencontrent 2 fois (à domicile et à l'extérieur) les 3 autres équipes de la poule. Le dernier club de chaque poule est directement relégué en Division d'Honneur.
Cette division a été appelée Championnat Luxembourgeois entre 1909 et 1914 puis Première Division entre 1914 et 1932 puis Division d'Honneur entre 1932 et 1957 puis Division Nationale depuis 1957. Les saisons grisées sont celles où le championnat n'a pas eu lieu.