Taq polymérase
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La Taq polymérase (aussi appelée « Taq pol » ou simplement « Taq ») est une enzyme, plus particulièrement une ADN polymérase qui agit dans une certaine gamme de température.
Elle a été isolée à partir de la bactérie thermophile Thermus aquaticus en 1969[1].
Sa demi-vie enzymatique à 95°C est de 40 minutes.
Elle est dépourvue d'activité exonucléasique, ce qui rend donc impossible la correction d'erreur lors de copie.
Certains mauvais résultats de la PCR (faux-négatifs[2]) sur certains échantillons d'ADN (notamment provenant de l'urine ou de crachats), pourraient être dus à un inhibiteur de cet enzyme présent dans l'urine, mais non dans le sang.
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Utilisations [modifier]
Cette enzyme est utilisée en biochimie pour faire des réactions de PCR.
Comme elle fait une erreur pour chaque million de paires de base, l'amplicon (le produit de la réaction) sera utilisé pour analyse.
Si l'on veut « cloner » le produit de réaction, alors on utilisera plutôt une Pwo-polymérase ou une Pfu-polymérase, qui font moins d'erreurs.
Clonage A-T [modifier]
La taq-polymérase ajoute un « A» à la fin du fragment généré.
Ceci permet de réaliser un clonage par bouts cohésifs avec un vecteur possédant un « T» .
« Hot Start » [modifier]
« Hot Start » désigne une enzyme ayant un inhibiteur (protéine chaperonne ou molécule chimique).
Cet inhibiteur doit être enlevé par le biais d'un chauffage de l'enzyme à 95°C pendant 10 ou 15 minutes. Cette opération est dite « activation de l'enzyme ».
Voir aussi [modifier]
Articles connexes [modifier]
Liens externes [modifier]
- (fr)
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Bibliographie [modifier]
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Notes et références [modifier]
- Dieter Perl, Uwe Mueller, Udo Heinemann et Franz X. Schmid, 2000, « Two exposed amino acid residues confer thermostability on a cold shock protein », Nature structural biology, volume 7, numéro 5, pages 380 à 383.
- Initiation à la biologie moléculaire ; Module : Amplification de gène, Fondation Mérieux
