Gélose TSC
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La gélose Tryptone Sulfite Cyclo-sérine (T.S.C.) est recommandée pour la recherche et le dénombrement de Clostridium perfringens et des germes anaérobies sulfito-réducteurs dans les eaux et les produits alimentaires.
La D-cyclo-sérine, ajoutée extemporanément au milieu de base, apporte une bonne sélectivité pour Clostridium perfringens et elle réduit la taille des halos noirs autour des colonies. Ce milieu peut également être additionné de jaune d'œuf pour la recherche de la lécithinase ou sans D-cyclo-sérine pour le contrôle des eaux.
Composition
Ingrédients en grammes pour un litre d'eau distillée ou déminéralisée.
| tryptone | 15.00 |
|---|---|
| Bisulfite de sodium | 1.00 |
| Peptone de soja | 5,00 |
| Citrate ferrique ammoniacal | 1,00 |
| Extrait de levure | 5.00 |
| Agar | 18.00 |
- pH final à 25 °C : 7,6 ± 0,2
Conservation
- Tubes ou flacons : 2 - 8 °C
- Milieu déshydraté : 2 - 30 °C
La date d’expiration est indiquée sur l’emballage.
Préparation
- Pour le milieu déshydraté
- Dissoudre 45 grammes dans 1 litre d’eau pure.
- Chauffer sous agitation fréquente et laisser bouillir 1 minute pour dissoudre complètement la suspension.
- Répartir en tubes de 20 ml ou flacons de 100 ml.
- Autoclave 15 minutes à 121 °C.
- Pour le milieu en tubes ou flacons
- Liquéfier le milieu à 100 °C au bain-marie.
- Bien mélanger, laisser refroidir à 45-47 °C. Ajouter dans chaque tube 0,2 ml (ou 1 ml/100 ml) d’une solution stérile à 4% de D-cyclosérine. Bien homogénéiser.
- Si désiré, ajouter une solution stérile de jaune d'œuf à raison de 80ml par litre (1,6 ml pour 20 ml).
- Alternativement le milieu peut être répartie immédiatement en boîtes de Petri et laissé à solidifier sur une surface froide.
La D-cyclo-sérine est thermolabile et se conserve de façon aléatoire dans les boites de Petri. Ne pas fabriquer plus de boites que nécessaire à la recherche en cours.
Utilisation
- Pour le milieu en tube
- Chauffer le produit à tester afin de détruire les formes végétatives et d'activer les spores.
- Pipette 1 ml du produit chauffé et de ses dilutions décimales dans les tubes en évitant l'incorporation de bulles d'air. Ne jamais chauffer les tubes ensemencés.
- Homogénéiser par retournement, refroidir les tubes dans un bain d'eau glacée, puis incuber à 46 °C ou 37 °C pendant 24 heures selon le protocole.
- Dénombrer les colonies entourées d’un halo noir, dû à la réduction du sulfite en précipité de sulfure de fer.
- Pour le milieu en boite
- Chauffer le produit à tester afin de détruire les formes végétatives et d'activer les spores.
- Introduire dans des boîtes de Petri stériles, 1 ml du produit à examiner ou de ces dilutions décimales.
- Ajouter dans les 15 minutes, dans chaque boîte, 15 ml de gélose TSC liquéfiée, mélanger soigneusement et laisser solidifier.
- Incuber en anaérobiose à 37 ou 46 °C pendant 24 heures.
- Dénombrer les colonies entourées d’un halo noir, dû à la réduction du sulfite en précipité de sulfure de fer. Faire la lecture très rapidement après la sortie de la jarre.
Lecture
Dénombrer les colonies entourées d’un halo noir. Lorsqu’elles sont cultivées en présence de jaune d’œuf, les colonies de Clostridium perfringens sont entourées d’une auréole opaque due à la production de lécithinase.
Contrôle qualité
- Milieu de base déshydraté : poudre beige, fluide et homogène.
- Milieu préparé (complet) : gélose ambrée.
- Réponse culturale de croissance (TSC complet avec D-cyclosérine) après 20 heures d’incubation en anaérobiose à 37 °C, en boîtes de Petri (XP CEN ISO/TS 11133-2) :
| Microorganismes | Croissance | Caractéristiques |
|---|---|---|
| Clostridium perfringens ATCC 13124
Clostridium perfringens NCTC 8238 Escherichia coli ATCC 25922 |
PR ≥ 50%
PR ≥ 50% inhibée |
colonies noires
colonies noires |
- Réponse culturale de croissance (TSC complet avec D-cyclosérine) après 20 heures d’incubation en anaérobiose à 46 °C, en boîtes de Petri (NF V 08-061) :
| Microorganismes | Croissance | Caractéristiques |
|---|---|---|
| Clostridium perfringens ATCC 13124
Escherichia coli ATCC 25922 |
PR ≥ 70%
inhibée |
colonies noires |
- Réponse culturale de croissance (TSC complet avec D-cyclosérine) après 24 heures d’incubation en anaérobiose à 36 °C, en tubes (NF T 90-415) :
| Microorganismes | Croissance | Caractéristiques |
|---|---|---|
| Clostridium perfringens ATCC 13124
Escherichia coli RIVM WR1 |
66% ≤ R3 ≤ 150%
inhibé |
colonies noires |
- Réponse culturale de croissance (TSC sans D-cyclosérine) après 20 heures d’incubation en anaérobiose à 37 °C (NF EN 26461-2 ; NF T 90-461)
