Far-western blot

Un article de Wikipédia, l'encyclopédie libre.
Aller à : navigation, rechercher
image illustrant la biologie
Cet article est une ébauche concernant la biologie.

Vous pouvez partager vos connaissances en l’améliorant (comment ?) selon les recommandations des projets correspondants.

Le far Western (ou far overlay) vise à détecter des interactions entre deux protéines X et Y. Cette technique dérive d’un Western Blot classique. Nous pouvons discriminer plusieurs étapes:

1-SDS-PAGE ou PAGE soit à partir d’un extrait protéique contenant la protéine X soit à partir de la protéine X purifiée (c'est-à-dire isolée).

2- Transfert sur membrane : la protéine X est alors fixée à la membrane. Remarque : si l'électrophorèse a été une SDS-PAGE, il faut d'abord laver la membrane dans une solution adéquate afin de permettre la renaturation des protéines qui y sont.

3- Incubation de la membrane avec la protéine Y, celle-ci devant obligatoirement être purifiée.

4- Lavage

5- Révélation avec des anti-corps anti-protéine Y. Remarque : si l'on ne dispose pas d'anti-corps anti-Y, on peut lui accrocher une séquence FLAG (petite protéine ou peptide contre lequel des anticorps sont disponibles).