Bleu de Coomassie

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Bleu de Coomassie
Structure du bleu de Coomassie
Structure du bleu de Coomassie
Identification
Synonymes

C.I. 42655
C.I. Acid Blue 90

No CAS 6104-58-1
No EINECS 228-058-4
SMILES
InChI
Propriétés chimiques
Formule brute C47H49N3NaO7S2
Masse molaire[1] 855,028 ± 0,054 g/mol
C 66,02 %, H 5,78 %, N 4,91 %, Na 2,69 %, O 13,1 %, S 7,5 %,
Unités du SI et CNTP, sauf indication contraire.

Le bleu de Coomassie (également appelé Brilliant Blue, Brilliant Blue G, Acid Blue 90, C.I. 42655, ou Brilliant Blue G 250) est un colorant bleu communément employé en électrophorèse sur gel de polyacrylamide avec dodécyl-sulfate de sodium (SDS-PAGE). Le gel est trempé dans le colorant pendant 30 minutes, avant d'en être débarrassé trente minutes ou davantage. Ceci permet la visualisation de bandes, indiquant la teneur en protéines du gel. La visualisation du gel contient habituellement un « marqueur », qui contient des protéines de poids moléculaire connu, ce qui permet d'évaluer le poids moléculaire des protéines de la solution ou du tissu à tester.


Usage en laboratoire[modifier | modifier le code]

Solution de bleu de Coomassie

Le bleu de Coomassie se lie supposément aux protéines via physisorption aux acides aminés basiques (principalement l'arginine) et aux aromatiques. Le bleu de Coomassie est un constituant intégral de la méthode de Bradford, permettant de déterminer la concentration en protéines d'une solution, pour autant qu'on connaisse la séquence de ses acides aminés. Cette méthode est basée sur les propriétés physico-chimiques du bleu de Coomassie, une solution acide dont l'absorbance initiale de 465 nm devient de 595 nm lorsqu'elle est liée aux protéines. Les données d'absorbance peuvent être utilisées avec la loi de Beer-Lambert afin de déterminer la concentration en protéines ainsi que leur taux dans une solution donnée.

Formule des solutions de teinte et lavage[modifier | modifier le code]

Solution de teinte[modifier | modifier le code]

2,5 g de bleu de Coomassie,
455 ml de méthanol ou d'éthanol,
455 ml d'eau distillée et désionisée (ddH2O),
90 ml d'acide acétique glacial (GAA)

(l'éthanol remplace avantageusement le méthanol car il est beaucoup moins toxique)

Solution de lavage (décoloration)[modifier | modifier le code]

455 ml de méthanol,
455 ml de ddH2O,
90 ml de GAA

(bien que le lavage puise être effectué à l'eau, en chauffant)

Une solution éthanol 10 % acide acétique 10 % est très efficace surtout chauffée (passage au four à micro-ondes de quelques minutes) et bien moins toxique que le méthanol.

Formule classique du réactif de Bradford[modifier | modifier le code]

0,01 % de bleu de Coomassie,
4,7 % d'éthanol,
8,5 % d'acide phosphorique, in ddH2O.

Nom[modifier | modifier le code]

Comme pour beaucoup de colorants, le bleu de Coomassie tient son nom de la localité africaine de Kumasi, actuellement dans le territoire du Ghana; il était développé comme teinture pour laine acide, et fut nommé en commémoration de l'occupation britannique de la capitale d'Ashanti en 1896, alors appelée Coomassie[2].

Liens externes[modifier | modifier le code]


Notes et références[modifier | modifier le code]

  1. Masse molaire calculée d’après « Atomic weights of the elements 2007 », sur www.chem.qmul.ac.uk.
  2. [1]