Bleu de Coomassie

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Bleu de Coomassie
Image illustrative de l'article Bleu de Coomassie
Structure du bleu de Coomassie
Identification
Synonymes

C.I. 42655
C.I. Acid Blue 90

No CAS 6104-58-1
No ECHA 100.025.509
No EINECS 228-058-4
SMILES
InChI
Propriétés chimiques
Formule brute C47H49N3NaO7S2
Masse molaire[1] 855,028 ± 0,054 g/mol
C 66,02 %, H 5,78 %, N 4,91 %, Na 2,69 %, O 13,1 %, S 7,5 %,

Unités du SI et CNTP, sauf indication contraire.

Le bleu de Coomassie est un colorant bleu communément employé pour colorer les protéines. En se liant aux protéines, le bleu de Coomassie permet soit de les doser par colorimétrie (méthode de Bradford), soit de les visualiser en gel d'électrophorèse type SDS-PAGE (Sodium DodedecylSulfate- PolyAcrylAmid Gel); il s'agit d'une électrophorèse de protéines en condition dénaturante.

Ce colorant des protéines existe sous deux formes : G-250 (également appelé Brilliant Blue, Brilliant Blue G, Acid Blue 90, C.I. 42655, ou Brilliant Blue G 250) et le R-250.(https://info.gbiosciences.com/blog/how-to-choose-between-g250-or-r250-coomassie-dyes). Le choix du colorant dépend de l'application désirée : il est recommandé d'utiliser le bleu de Coomassie G-250 pour la méthode colorimétrique et le R-250 en électrophorèse; bien que le G-250 puisse aussi être utilisé pour l'électrophorèse (sans étape de décoloration du fait de sa solubilité).

Usage en laboratoire[modifier | modifier le code]

Solution de bleu de Coomassie

Le bleu de Coomassie se lie supposément aux protéines via physisorption aux acides aminés basiques (principalement l'arginine) et aux aromatiques. Le bleu de Coomassie G-250 est un constituant intégral de la méthode de Bradford, permettant de déterminer la concentration en protéines d'une solution, pour autant qu'on connaisse la séquence de ses acides aminés. Sous cette forme, le bleu de Coomassie forme un complexe soluble dont l'intensité de coloration est proportionnelle à la concentration en protéine.[Bradford Coomassie brilliant blue G-250 protein-binding dye] Cette méthode est basée sur les propriétés physico-chimiques du bleu de Coomassie, une solution acide dont l'absorbance initiale de 465 nm devient de 595 nm lorsqu'elle est liée aux protéines. Les données d'absorbance peuvent être utilisées avec la loi de Beer-Lambert afin de déterminer la concentration en protéines ainsi que leur taux dans une solution donnée. Cependant l'intensité de coloration dépend de la nature de la protéine dosée.

Le bleu de Coomassie est également utilisé pour révéler les protéines après séparation par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de sodium dodécyl sulfate (SDS-PAGE). Après migration des protéines, le gel est démoulé puis trempé dans une solution acide du colorant, et enfin soumis à des lavages pour enlever l'excès de bleu qui ne reste fixé que sur les protéines[2].

Formule des solutions de teinte et lavage[modifier | modifier le code]

Solution de coloration[modifier | modifier le code]

2,5 g de bleu de Coomassie R-250
455 ml de méthanol ou d'éthanol,
455 ml d'eau distillée et désionisée (ddH2O),
90 ml d'acide acétique glacial (GAA)

(l'éthanol remplace avantageusement le méthanol car il est beaucoup moins toxique)

Solution de lavage (décoloration)[modifier | modifier le code]

455 ml de méthanol,
455 ml de ddH2O,
90 ml de GAA

(bien que le lavage puisse être effectué à l'eau, en chauffant)

Une solution éthanol 10 % acide acétique 10 % est très efficace surtout chauffée (passage au four à micro-ondes de quelques minutes) et bien moins toxique que le méthanol.

Formule classique du réactif de Bradford[modifier | modifier le code]

0,01 % de bleu de Coomassie G-250
4,7 % d'éthanol,
8,5 % d'acide phosphorique, in ddH2O.

Nom[modifier | modifier le code]

Comme pour beaucoup de colorants, le bleu de Coomassie tient son nom de la localité africaine de Kumasi, actuellement dans le territoire du Ghana; il était développé comme teinture pour laine acide, et fut nommé en commémoration de l'occupation britannique de la capitale d'Ashanti en 1896, alors appelée Coomassie[3].

Liens externes[modifier | modifier le code]


Notes et références[modifier | modifier le code]

  1. Masse molaire calculée d’après « Atomic weights of the elements 2007 », sur www.chem.qmul.ac.uk.
  2. T. S. Meyer et B. L. Lamberts, « Use of Coomassie brilliant blue R250 for the electrophoresis of microgram quantities of parotid saliva proteins on acrylamide-gel strips », Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects, vol. 107,‎ , p. 144–145 (DOI 10.1016/0304-4165(65)90403-4, lire en ligne)
  3. [1]